藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法總則

　１．抽樣
　　１．１　供試品一般按批號(hào)抽樣
　　１．２　抽樣時(shí)，凡發(fā)現(xiàn)有異常或可疑的樣品，應(yīng)抽選有疑問(wèn)的樣品，但因機(jī)械損傷明顯破裂的包裝不得作為樣品。
　　１．３　凡已能從藥品、瓶口（外蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍）外觀看出長(zhǎng)螨、發(fā)霉、蟲蛀以及變質(zhì)的藥品，可直接判為不合格品，無(wú)需再抽樣檢驗(yàn)。
　　１．４　抽樣量一般應(yīng)為檢驗(yàn)用量（２個(gè)以上最小包裝單位）的３倍量。
　　１．５　一般采用隨機(jī)抽樣方法抽樣。

　２．供試品保存
　　２．１　供試品在檢驗(yàn)之前，應(yīng)保存在陰涼干燥處（勿冷藏或冷凍），以防供試品中的污染菌因保藏條件所引起致死、損傷或繁殖。
　　２．２　供試品在檢驗(yàn)之前，應(yīng)保持原包裝狀態(tài)，嚴(yán)禁開啟。包裝已開啟的樣品不得為供試品。

　３．檢驗(yàn)
　　３．１　供試品檢驗(yàn)項(xiàng)目按中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒布的《藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》確定。
　　３．２　檢驗(yàn)的全過(guò)程必須符合無(wú)菌技術(shù)要求。
　　３．３　除另有規(guī)定外，供試品制備成供試液后，應(yīng)在均勻狀態(tài)取樣。
　　３．４　供試品制成供試液后，應(yīng)在１小時(shí)內(nèi)注皿操作完畢。

　４．檢驗(yàn)量
　　４．１　所有劑型的檢驗(yàn)均需取自２個(gè)以上包裝單位。
　　４．２　口服固體制劑
　　中成藥丸劑、片劑、沖劑、散劑、膠劑、茶劑、曲劑、膠囊劑等檢驗(yàn)量均為１０ｇ。蜜丸除應(yīng)取自２個(gè)以上包裝外，還應(yīng)取自４丸以上。
　　化學(xué)藥品、生化藥品的粉劑、膠囊劑、片劑、沖劑、滴丸劑等檢驗(yàn)量為１０ｇ。
　　４．３　口服液體制劑：糖漿劑、乳劑、合劑、溶液劑、混懸劑、酒劑等檢驗(yàn)量為１０ｍｌ。
　　４．４　半固體制劑：膏劑等檢驗(yàn)量為１０ｇ。
　　４．５　外用液體制劑：滴眼劑、滴鼻劑及其他液體制劑檢驗(yàn)量為１０ｍｌ。
　　４．６　外用栓劑、軟膏劑、眼膏劑等檢驗(yàn)量為５ｇ。
　　４．７　膜劑，除另有規(guī)定外，中藥膜劑檢驗(yàn)量取３０～５０平方厘米，化學(xué)藥及生化藥膜劑取１０平方厘米，以上均需取自２個(gè)以上包裝并４片以上。
　　４．８　特殊貴重的或極微量包裝的藥品，其檢驗(yàn)量可酌減。除另有規(guī)定外，口服固體制劑不得低于３ｇ；液體制劑采用原液者不得少于６ｍｌ、采用供試液者不得少于３ｍｌ；外用藥品不得少于５ｇ。
　　４．９　檢查活螨的取樣量，見活螨檢驗(yàn)法。

　５．供試液的制備
　　５．１　一般供試品的供試液制備方法。
　　５．１．１　固體供試品　稱取１０ｇ，置研缽中，以１００ｍｌ稀釋劑（生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）分次加入研磨細(xì)勻，并轉(zhuǎn)移至２５０ｍｌ錐形瓶中，使成１∶１０供試液。或?qū)⒐┰嚻泛拖♂寗┩脛驖{儀中，以轉(zhuǎn)速３０００～５０００轉(zhuǎn)／分，開機(jī)１—２分鐘。
　　對(duì)吸水膨脹或粘度大的供試品，可制成１∶２０供試液。
　　５．１．２　液體供試品　量取１０ｍｌ，加入含９０ｍｌ稀釋劑的２５０ｍｌ錐形瓶中，混勻成１∶１０供試液。
　　合劑（含王漿、蜂蜜者）、滴眼劑等可以原液為供試液。
　　５．１．３　半固體供試品　稱取１０ｇ，加入含１００ｍｌ稀釋劑的２５０ｍｌ錐形瓶中，混勻成１∶１０供試液。
　　５．２　特殊供試品的供試液制備方法
　　５．２．１　非水溶性基質(zhì)供試品供試液的制備方法
　　（１）軟膏劑、乳膏劑
　　吐溫西黃蓍膠（或羧甲基纖維素鈉）法　稱取供試品５ｇ，置研缽或燒杯中，加吐溫—８０①８ｍｌ，充分研勻。加入西黃蓍膠或羧甲基纖維素鈉②２．５ｇ，充分研勻以９２ｍｌ４５℃的稀釋劑，邊加邊研磨，使成均勻乳劑，并移至２５０ｍｌ錐形瓶中，即為１∶２０供試液。
　　注①　吐溫—８０預(yù)先以１２１℃高壓滅菌２０分鐘。
　　　②　西黃蓍膠、羧甲基纖維素鈉預(yù)先以１４０℃干熱滅菌３０分鐘。
　　液體石蠟吐溫法　稱取供試品５ｇ，分別量取液體石蠟（液體石蠟，預(yù)先以１６０℃干熱滅菌２小時(shí)）２０ｍｌ，吐溫—８０　２０ｍｌ，稀釋劑６０ｍｌ。先將供試品置研缽中，邊研磨邊加液體石蠟，然后再邊研磨邊滴加吐溫—８０，研磨均勻后，再邊加稀釋劑邊研磨，初始每次約１ｍｌ，待起團(tuán)塊時(shí)，加入量可增至約３ｍｌ，稍停１分鐘，再輕輕研磨至乳化，將稀釋劑加完為止。即得１∶２０供試液。
　　（２）栓劑　稱取供試品５ｇ，置２５０ｍｌ錐形瓶（內(nèi)含玻璃珠若干粒）中，加適量稀釋劑，置４５℃水浴浸泡１０分鐘使融，加吐溫—８０２～４ｍｌ，振搖使之乳化，再加稀釋劑（稀釋劑和吐溫總量為５０ｍｌ）制成１∶１０供試液。
　　（３）油劑　量取供試品１０ｍｌ，加入１％吐溫—８０稀釋劑９０ｍｌ，混勻，制成１∶１０供試液。
　　５．２．２　膠囊劑、膠丸及膠劑供試液制備方法
　　（１）膠囊劑、膠丸劑　稱取供試品１０ｇ置錐形瓶中，加入稀釋劑１００ｍｌ，于４５℃水浴中振搖至溶，即為１∶１０供試液。
　　（２）膠劑　取膠劑若干，搗碎，稱取１０ｇ，再用研缽研細(xì)，轉(zhuǎn)入２５０ｍｌ錐形瓶中，加入稀釋劑１００ｍｌ，置于４５℃水浴中，振搖使溶，即為１∶１０供試液。
　　５．２．３腸溶膠囊（片）劑供試液制備方法
　　稱取供試品１０ｇ，置錐形瓶中并放入４５℃水浴，加入ＰＨ６．８磷酸鹽緩沖液（附錄二２）１００ｍｌ，保溫、振搖，使腸衣溶解，混勻，即得１∶１０供試液。
　　５．２．４　氣霧劑供試液制備方法。
　　將供試品置冰室內(nèi)２小時(shí)后，取出，用滅菌鋼錐小心鉆孔，使拋射劑緩慢釋放，然后再用滅菌注射器加入適量稀釋劑，混勻后吸取相當(dāng)于１０ｇ或１０ｍｌ的供試品，再稀釋成１∶１０供試液。
　　５．２．５　膜劑供試液制備方法
　　中藥膜劑　除另有規(guī)定外，取３０—５０平方厘米，將藥膜剪成碎片，置錐形瓶中，加稀釋劑適量，使每１０ｍｌ含１平方厘米濃度，浸泡１０～１５分鐘，搖勻，即得。
　　化學(xué)藥膜劑　除另有規(guī)定外，取１０平方厘米，置錐形瓶中，加稀釋劑１００ｍｌ，浸泡、振蕩使溶，即得。必要時(shí)，可置４５℃水浴中助溶。
　　５．３　含抑菌成分供試品的供試液制備方法。
　　凡含有防腐劑或抑菌成分且影響檢驗(yàn)（陽(yáng)性對(duì)照控制菌不生長(zhǎng)）的供試品，可根據(jù)供試品的性質(zhì)，控制菌的特性及檢驗(yàn)條件等按下列方法之一（或兩種以上方法聯(lián)合應(yīng)用）及其他適宜方法處理后，作控制菌檢驗(yàn)。
　　５．３．１　離心沉淀法
　　可溶性供試液　取供試液１０ｍｌ，置入刻度離心管中，以３０００轉(zhuǎn)／分以上離心沉淀３０分鐘，用毛細(xì)吸管吸取上清液棄掉，留下管底約２ｍｌ殘余液，將其全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。
　　混懸供試液　取供試液１０ｍｌ，置刻度離心管中，先以５００轉(zhuǎn)／分離心沉淀５分鐘，取其上層液移入另一離心管中，再經(jīng)３０００轉(zhuǎn)／分以上離心沉淀３０分鐘，棄去上清液，保留約２ｍｌ殘余液，全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。
　　本法適用于一些抑菌作用不強(qiáng)的中、西藥品，如蜜丸、水丸、片劑、散劑、沖劑、膠囊劑及液體制劑。
　　應(yīng)用本法須嚴(yán)防操作污染，并注意上層液或上清液和管底殘?jiān)姆蛛x，避免沉渣混入其中。
　　５．３．２　薄膜過(guò)濾法
　　取規(guī)定量的供試液，按１ｍｌ加生理鹽水約１０ｍｌ的比例，混勻，置入薄膜過(guò)濾器內(nèi)，減壓過(guò)濾至干，再以生理鹽水或其他適宜溶劑沖洗濾膜３次，每次５０ｍｌ。取出濾膜，剪成２—４片，使每片相當(dāng)于供試品１ｇ或１ｍｌ。放入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。
　　本法適用于水溶性抑菌成分的中、西藥品和滴眼劑等的制劑“滅活”處理。
　　安放濾膜時(shí)，注意濾膜與濾器應(yīng)密合，防止濾膜破損、漏液。本法所用微孔濾膜孔徑應(yīng)為０．４５±０．０２μｍ。
　　５．３．３　鈍化劑中和法
　　磺胺類藥物中和法　取規(guī)定量供試液，加入含１％對(duì)氨基苯甲酸０．５ｍｌ的１００ｍｌ增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。
　　本法適用于含磺胺較少的制劑、如三磺軟膏、消炎眼藥水、斑馬眼藥水等。
　　應(yīng)用本法可因供試品不同，對(duì)氨基苯甲酸的用量，可適當(dāng)調(diào)整。
　　含重金屬藥物中和法　取規(guī)定量供試液，加入硫乙醇酸鈉—胱氨酸增菌液（附錄三３６）１００ｍｌ中，作增菌培養(yǎng)即得。
　　本法適用于含重金屬鹽類藥物的檢驗(yàn)，如磺胺嘧啶銀軟膏等。
　　含洗必泰等制劑中和法　取規(guī)定量供試液，加入含適量吐溫—８０等表面活性劑的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。
　　本法適用于洗必泰含片、洗必泰栓、霉滴栓及其他含抑菌成分的供試品。
　　應(yīng)用本法須注意，由于供試品不同，用量應(yīng)預(yù)試，表面活性劑的用量應(yīng)預(yù)試，用量不可過(guò)大，否則本身亦產(chǎn)生抑菌作用。
　　５．３．４　沉降法
　　（１）取規(guī)定量供試液，自然沉降５分鐘，吸取上層液于增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。
　　（２）取規(guī)定量供試液，自然沉降５分鐘，吸取上層液于含１％對(duì)氨基苯甲酸１ｍｌ的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。
　　本法適用于水溶性小的抗菌制劑檢驗(yàn)，如磺胺類藥。（１）法適用于單一成分固體制劑，如磺胺嘧啶片檢驗(yàn)；（２）法適用于復(fù)方磺胺制劑，如復(fù)方磺胺嘧啶片、復(fù)方新諾明片等檢驗(yàn)。
　　應(yīng)用本法時(shí)，供試品應(yīng)充分研細(xì)，并與稀釋劑充分搖勻，使污染菌分散于液相中；沉降時(shí)間不宜超過(guò)５分鐘，以防菌細(xì)胞下沉；取上層液時(shí)，避免吸入藥渣。
　　５．３．５　稀釋法
　　取供試液１０ｍｌ，加入較大量增菌液中（使該供試品稀釋至陽(yáng)性對(duì)照菌能生長(zhǎng)的濃度），作增菌培養(yǎng)即得。
　　本法適用于抑菌作用不強(qiáng)的中藥、化學(xué)藥品檢驗(yàn)。

　６．對(duì)照試驗(yàn)
　　６．１　陰性對(duì)照試驗(yàn)　測(cè)試檢驗(yàn)全過(guò)程無(wú)菌技術(shù)的可靠性。
　　６．１．１　菌數(shù)測(cè)定陰性對(duì)照試驗(yàn)：用吸管從供用的稀釋劑中各吸取１ｍｌ于４個(gè)無(wú)菌平皿中，分別按細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)測(cè)定方法注皿培養(yǎng)、檢查，不得長(zhǎng)菌。
　　６．１．２　控制菌檢驗(yàn)陰性對(duì)照試驗(yàn)：用吸管從供用的稀釋劑中吸取１ｍｌ于增菌液中，按控制菌檢驗(yàn)方法檢查，不得長(zhǎng)菌。
　　６．２　陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)　檢查供試品是否對(duì)控制菌生長(zhǎng)產(chǎn)生干擾作用及檢查培養(yǎng)條件是否適宜。
　　６．２．１　陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)　方法同供試品檢驗(yàn)，于供試液中加入一定量的相應(yīng)對(duì)照菌，作平行試驗(yàn)。
　　６．２．２　規(guī)定陽(yáng)性對(duì)照菌株：大腸桿菌（ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２）、沙門氏菌（ＣＭＣＣ（Ｂ）５００９４、綠膿桿菌（ＣＭＣＣ（Ｂ）１０１０４）、金黃色葡萄球菌（ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３）及破傷風(fēng)桿菌（ＣＭＣＣ（Ｂ）６４０６７）。
　　６．２．３　對(duì)照菌的加入量為５０～１００個(gè)，可事前預(yù)試確定。需氣菌常用計(jì)數(shù)方法，取３７℃培養(yǎng)１８～２０小時(shí)的新鮮肉湯培養(yǎng)物，１０倍遞增稀釋至０．０００００６，取其０．１ｍｌ于普通肉湯瓊脂平板表面涂抹或取０．００００００７稀釋液１ｍｌ以注皿法進(jìn)行菌數(shù)測(cè)定。
　　６．２．４　當(dāng)供試品未檢出供試菌時(shí)，而陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)也未能檢出，不能做出供試品未檢出控制菌的結(jié)論。
　　６．２．５　陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)操作必須與供試品檢驗(yàn)操作嚴(yán)格分開，避免交叉污染。

　７．檢驗(yàn)報(bào)告單位
　　７．１　細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)和酵母菌數(shù)的測(cè)定一般以１ｇ或１ｍｌ為單位的菌落數(shù)表示。中藥膜劑以１０平方厘米、化學(xué)藥及生化藥膜劑以１平方厘米為單位的菌落數(shù)表示。眼科用藥的霉菌和酵母菌數(shù)以１ｇ或１ｍｌ為單位的菌落數(shù)或“未檢出”表示。
　　７．２　控制菌檢驗(yàn)報(bào)告　一般以１ｇ或１ｍｌ、中藥膜劑以１０平方厘米、化學(xué)及生化藥膜劑以１平方厘米為單位報(bào)告“檢出”或“未檢出”。

　８．復(fù)試
　　８．１　菌數(shù)測(cè)定不合格者應(yīng)復(fù)試。控制菌檢驗(yàn)以１次檢出為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試，但應(yīng)保留檢出菌株１個(gè)月備查。
　　８．２　復(fù)試項(xiàng)目以不合格項(xiàng)目為準(zhǔn)，作單項(xiàng)復(fù)試。
　　８．３　復(fù)試需另取同批號(hào)樣品，測(cè)定２次。
　　８．４　復(fù)試報(bào)告　以３次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值報(bào)告。
　　８．５　眼科用藥的霉菌和酵母菌數(shù)復(fù)試報(bào)告，須以二次復(fù)試結(jié)果均不得長(zhǎng)菌，方可判定合格。

　９．特別抽樣
　　不符合部頒藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的藥品，經(jīng)衛(wèi)生行政部門審批準(zhǔn)予在不影響外觀與質(zhì)量的前提下，允許采取適宜措施進(jìn)行處理，處理后的藥品抽樣按本款進(jìn)行。
　　９．１　抽樣方法
　　大包裝抽樣，按出廠的大包裝，１０件以下抽１件，１０件以上每增加２０件加抽１件，最后不足１０件者不加抽，超過(guò)１０件加抽１件。小包裝抽樣，按規(guī)定手續(xù)，從大包裝中隨機(jī)抽取小包裝２個(gè)以上單位為供試品。
　　９．２　檢驗(yàn)項(xiàng)目：按部頒《藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定檢驗(yàn)，不得單項(xiàng)檢驗(yàn)。
　　９．３　檢驗(yàn)報(bào)告
　　９．３．１　測(cè)定菌數(shù)報(bào)告：以各次測(cè)定結(jié)果全部平均值報(bào)告。
　　９．３．２　控制菌按全部復(fù)試檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告①，如全部復(fù)試均未檢出控制菌時(shí)，報(bào)告為：“按規(guī)定抽樣檢驗(yàn)結(jié)果未檢出××菌”；①如全部抽樣中任一樣品檢出控制菌時(shí)，報(bào)告為：“按規(guī)定抽樣檢驗(yàn)，檢出××菌，不符合藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定”。
　　注①　報(bào)告中寫出具體的控制菌名稱。

　　　　　　　　　　　　　　 細(xì)菌數(shù)測(cè)定

　１．培養(yǎng)基、試劑
　　１．１　肉湯瓊脂（或０．００１％ＴＴＣ肉湯瓊脂）（附錄三２，４）
　　１．２　ＰＨ７．２磷酸鹽緩沖液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）或生理鹽水（附錄二）
　２．檢驗(yàn)程序

－－－－－ 制備 －－－－－－　稀釋　－－－－－－－　稀釋　－－－－－－－－
｜供試品｜－－→｜１∶１０｜－－－→｜１∶１００｜－－－→｜１∶１０００｜
－－－－－　　　｜　供試液｜　　　　｜　供試液　｜　　　　｜　供試液　　｜
　　　　　　　　－－－－－－　　　　－－－－－－－　　　　－－－－－－－－
　　　　　　　　　　↓１ｍｌ　　　　　　　↓１ｍｌ　　　　　　　↓１ｍｌ
　　　　　　　　－－－－－－　　　　－－－－－－－　　　　－－－－－－－－
　　　　　　　　｜　平皿　｜　　　　｜　平皿　　｜　　　　｜　　平皿　　｜
　　　　　　　　｜２～３個(gè)｜　　　　｜　２～３個(gè)｜　　　　｜　２～３個(gè)　｜
　　　　　　　　－－－－－－　　　　－－－－－－－　　　　－－－－－－－－
　　　　　　　　　　｜　　　　　　　　　　｜　　　　　　　　　 ｜
　　　　　　　　　　－－－－－－－－－－－↓－－－－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　｜　注皿　　｜
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　干燥
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　｜　培養(yǎng)　　｜
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　３０～３５℃↓４８±２小時(shí)
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　｜　菌落計(jì)數(shù)｜
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　｜　報(bào)告　　｜
　　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－

　３．操作步驟
　　３．１　供試液制備，經(jīng)陰性對(duì)照取樣后，按各類制劑制備供試液的方法（總則５）制備。
　　３．２　稀釋及吸樣
　　稀釋級(jí)一般應(yīng)采用３級(jí)。
　　稀釋　取１ｍｌ吸管１支，吸取混勻的１∶１０供試液（或原液、１∶２０供試液）１ｍｌ，在離稀釋劑液面上約１ｃｍ處，沿管壁注入裝有９ｍｌ的稀釋劑的試管中，混勻成１∶１００（或１∶１０、１∶２００）的稀釋液。
　　吸樣　用上述吸管分別取１∶１０供試液（或原液、１∶２０供試液）１ｍｌ，注入２～３個(gè)平皿中。
　　以另一支１ｍｌ吸管，按上述操作，作下一級(jí)的稀釋與吸樣。
　　操作時(shí)，應(yīng)特別注意每次吸液前必須使稀釋液充分混勻（吸管反復(fù)吹吸數(shù)次或充分震蕩），以使菌體充分均勻分散，降低測(cè)定誤差。
　　３．３　傾注瓊脂（注皿）與干燥
　　３．３．１　事先將肉湯瓊脂融化、置４５℃水浴中，備用
　　３．３．２　當(dāng)供試液及各級(jí)稀釋液均注入平皿后，以上述瓊脂傾注入平皿，每皿約１５ｍｌ，隨即轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使樣液與瓊脂混勻后置水平臺(tái)上待凝。
　　３．３．３　干燥　瓊脂凝固后，在凈化條件下開蓋倒置或換滅菌的陶瓦蓋，使平板干燥，減少平板表面的水分，防止菌落蔓延生長(zhǎng)。干燥時(shí)間一般在３小時(shí)左右，干燥時(shí)間計(jì)入培養(yǎng)時(shí)限。
　　３．４　將上述平板倒置于３０～３５℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)４８±２小時(shí)。

　４．菌落計(jì)數(shù)
　　４．１　細(xì)菌菌落是１個(gè)菌細(xì)胞或菌細(xì)胞團(tuán)在局限位置上，經(jīng)一定條件繁殖成肉眼可見的細(xì)菌群體。由于細(xì)菌種類繁多，形成菌落大小、形狀、色澤、透明度等皆因種而異，差別甚大。計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于平板背面或正面仔細(xì)觀察。不要漏計(jì)瓊脂層內(nèi)和平板邊緣生長(zhǎng)的菌落。并須注意細(xì)菌菌落與藥渣或培養(yǎng)基的沉淀物，酵母菌及霉菌菌落的區(qū)別。必要時(shí)，用顯微鏡鑒別。
　　４．２　用肉眼直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用５～１０倍放大鏡檢查，有否遺漏。
　　４．３　若平板上有２個(gè)或２個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以２個(gè)或２個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
　　４．４　平板上有片狀菌落或花斑樣菌落蔓延生長(zhǎng)以及平板受到污染的情況，該平板計(jì)數(shù)無(wú)效。
　　４．５　計(jì)算各稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)。
　　４．５．１　當(dāng)用一稀釋級(jí)使用２個(gè)平板時(shí)，應(yīng)采用２個(gè)平板菌落數(shù)的均值為平均平板菌落數(shù)。若２個(gè)平板菌落數(shù)相差在１倍以上時(shí)，該稀釋級(jí)不宜采用，但不包括２個(gè)平板菌落數(shù)均在１５個(gè)以下的情況①。
　　注①　１５以下兩平板菌落數(shù)允許幅度０～４、１～７、２～９、３～１０、４～１２、５～１４、６～１５、７～１７、８～１８、９～１９、１０～２０。
　　４．５．２　當(dāng)同一稀釋級(jí)使用３個(gè)平板時(shí)，應(yīng)采用３個(gè)平板菌落數(shù)的均值為平均菌落數(shù)。若其中１個(gè)平板菌落數(shù)與其他２個(gè)相近的平板菌落數(shù)的均值相差１倍以上時(shí)，該平板菌落數(shù)不能參與平均，但不包括平板菌落數(shù)均在１０個(gè)以下的情況②。
　　注②　１０以下３平板最大與最小菌落數(shù)的允許幅度，０～３、１～５、２～７、３～９、４～１０、５～１２、６～１３、７～１４。

　５．菌數(shù)報(bào)告規(guī)則
　　一般宜選取平均平板菌落數(shù)在３０～３００間的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)計(jì)算的依據(jù)。
　　５．１　若有１個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)處在３０～３００時(shí)，將該稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．２　若有２個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)處在３０～３００時(shí)，先計(jì)算兩稀釋級(jí)菌落數(shù)的比值。

　　　　　　高稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)
　　比值＝－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
　　　　　　低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)
　　
　　５．２．１　當(dāng)比值≤２時(shí)，以兩級(jí)的菌落數(shù)均值為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．２．２　當(dāng)比值＞２時(shí)，以低稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．３　若有３個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均處在３０～３００時(shí)，采用后２個(gè)稀釋級(jí)計(jì)算級(jí)間比值。
　　５．３．１　當(dāng)比值≤２時(shí)，以兩級(jí)的菌落數(shù)的均值為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．３．２　當(dāng)比值＞２時(shí)，以低稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．４　若各稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)均在３００以上，按最高的稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)，或適當(dāng)增加稀釋級(jí)，重作測(cè)定后報(bào)告結(jié)果。
　　５．５　若各稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均不在３０～３００間，其中一稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)大于３００，相鄰稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)又小于３０時(shí)，以最接近３０或３００的稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．６　若各稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)均小于３０時(shí)，按最低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。但若應(yīng)用原液為供試液，當(dāng)１∶１０稀釋級(jí)與原液的平均平板菌落數(shù)相等或大于時(shí)，應(yīng)以培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定，按測(cè)定結(jié)果報(bào)告菌數(shù)。
　　培養(yǎng)基稀釋法：
　　吸取供試液（原液或１∶１０供試液）１ｍｌ，注入５個(gè)平皿內(nèi)（每皿０．２ｍｌ，總量為１ｍｌ）。共作３份，共１５個(gè)平皿。每皿傾注融化并冷至４５℃左右的普通肉湯瓊脂約１５ｍｌ，旋轉(zhuǎn)混合，冷凝后按規(guī)定培養(yǎng)溫度與時(shí)限培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。
　　將每ｍｌ注入５個(gè)平板的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果合并為每ｍｌ菌落數(shù)，共得３組數(shù)據(jù)。取３組數(shù)據(jù)平均值乘稀釋倍數(shù)，為報(bào)告菌數(shù)。
　　５．７　若各稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均無(wú)菌落生長(zhǎng)或測(cè)定數(shù)在１０個(gè)以下時(shí)，報(bào)告菌數(shù)為＜１０個(gè)。

　　表１：　　　　　　　　細(xì)菌數(shù)報(bào)告規(guī)則舉例

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｜　　　｜　　　｜　　　供試品稀釋倍數(shù)　｜級(jí)間｜　　　　｜　　　　　報(bào)告數(shù)　｜
｜　規(guī)則｜　原液｜－－－－－－－－－－－｜　　｜　菌落數(shù)｜　　　　　　　　　｜
｜　　　｜　　　｜　－1 ｜　－2 ｜　－3 ｜比值｜　　　　｜　　　　　書　寫　｜
｜　　　｜　　　｜10　　｜10　　｜10　　｜　　｜　　　　｜　　　　　　　　　｜
｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜
｜　5.1 ｜　－　｜1365　｜　164 ｜　20　｜　－｜　16400 ｜　16×10　或16000 ｜
｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　｜　　　　｜　　　　3　　　　 ｜
｜5.2.1 ｜　－　｜2760　｜　295 ｜　46　｜1.6 ｜　37750 ｜　38×10　或38000 ｜
｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　｜　　　　｜　　　　3　　　　 ｜
｜5.2.2 ｜　－　｜2890　｜　271 ｜　60　｜2.2 ｜　27100 ｜　27×10　或27000 ｜
｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　｜　　　　｜　　　　3　　　　 ｜
｜5.3.1 ｜　－　｜　239 ｜　202 ｜　35　｜1.7 ｜　27600 ｜　28×10　或28000 ｜
｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　｜　　　　｜　　　　3　　　　 ｜
｜5.3.2 ｜　－　｜　236 ｜　196 ｜　42　｜2.1 ｜　19600 ｜　20×10　或20000 ｜
｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　｜　　　　｜　　　　4　　　　 ｜
｜　5.4 ｜　－　｜不可計(jì)｜4650　｜　513 ｜　－｜513000　｜51×10　或510000　｜
｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　　｜　　｜　　　　｜　　　　3　　　　 ｜
｜　5.5 ｜　－　｜不可計(jì)｜　305 ｜　12　｜　－｜　30500 ｜　30×10　或30000 ｜
｜　5.6 ｜　－　｜　24　｜　19　｜　12　｜　－｜　　240 ｜　　24×10或240　 ｜
｜　5.6 ｜ 22.3 ｜　27　｜　　7 ｜　－　｜　－｜　　270 ｜　　27×10或270　 ｜
｜　5.7 ｜　－　｜　0.6 ｜　　0 ｜　0　 ｜　－｜　　　6 ｜　　　　＜10　　　｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

　６．報(bào)告數(shù)書寫
　　６．１　菌落數(shù)在１００個(gè)以內(nèi)時(shí)，按實(shí)測(cè)數(shù)書寫報(bào)告。
　　６．２　菌落數(shù)大于１００時(shí)，取二位有效數(shù)字，第三位數(shù)按有效數(shù)字處理規(guī)則處理，為簡(jiǎn)便計(jì)，也可用１０的指數(shù)報(bào)告。

　　　　　　　　　　　　 霉菌和酵母菌數(shù)測(cè)定

　１．培養(yǎng)基、試劑
　　１．１　ＰＨ７．２磷酸鹽緩沖液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）（附錄二２）
　　１．２　生理鹽水（附錄二２）
　　１．３　ＹＰＤ瓊脂培養(yǎng)基（附錄三６）
　　１．４　虎紅瓊脂培養(yǎng)基（附錄三５）
　２．檢驗(yàn)程序

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｜供試品｜－－→｜1:10供試液｜－－→｜1:100供試液｜－→ ｜1:1000供試液｜
－－－－－　　　－－－－－－－　　　－－－－－－－　　　－－－－－－－－
　　　｜　合劑（含蜂蜜或　　｜　　　　　 ｜　　　　　　　　　　　　｜
　　　｜　　　　王漿者）　　｜　　　　　 ｜　　　　　　　　　　　　｜
　　　↓　滴眼劑　　　　　　↓　　　　　 ↓　　　　　　　　　　　　↓
－－－－－－－　　－－－－－－－　　－－－－－－－　　　－－－－－－－－
｜平皿2～3個(gè)｜　　｜平皿2～3個(gè)｜　　｜平皿2～3個(gè)｜　　　｜平皿２～３個(gè)｜
－－－－－－－　　－－－－－－－　　－－－－－－－　　　－－－－－－－－
　　　｜　　　　　　　　　　｜　　　　　 ｜　　　　　　　　　　　　｜
　　　－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　　　　－－－－－－－－－－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　｜　　虎紅瓊脂，ＹＰＤ瓊脂　　｜
　　　　　　　　　　　　｜（含蜂蜜或王漿的合劑用）注皿｜
　　　　　　　　　　　　－－－－－－－－－－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　｜　培　養(yǎng)　｜
　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　２５～２８℃↓７２±２小時(shí)
　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　｜　菌落計(jì)數(shù)　　｜
　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－
　　　　　　　　　　　　　　　　　｜　報(bào)　告　｜
　　　　　　　　　　　　　　　　　－－－－－－－

　３．操作步驟
　　３．１　供試液的制備（總則５）與稀釋，按細(xì)菌數(shù)測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行。稀釋級(jí)一般采用３級(jí)。合劑（含蜂蜜或王漿者）和滴眼劑可用原液作第１級(jí)供試液，分別在作１０倍遞增稀釋的同時(shí)，即可取該稀釋級(jí)的吸管吸取１ｍｌ稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋級(jí)２～３個(gè)平皿。
　　３．２　各稀釋液注入平皿后，應(yīng)及時(shí)將融化并冷至４５℃左右的虎紅瓊脂培養(yǎng)基（如供試品為含蜂蜜或王漿的合劑，加用ＹＰＤ瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定酵母菌數(shù)）約１５ｍｌ傾注平皿內(nèi)，搖勻待凝。
　　３．３　凝固后，置２５～２８℃培養(yǎng)箱內(nèi)，一般培養(yǎng)７２±２小時(shí)，如有可疑，可標(biāo)記后適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。

　４．菌落計(jì)數(shù)方法
　　４．１　菌落形態(tài)
　　４．１．１　霉菌菌落形態(tài)：具有放射狀或樹狀分枝的菌絲是霉菌菌落的特征。初形成時(shí)，多無(wú)色透明，有明顯的折光性，在較暗的背景下，以透射光觀察，易于識(shí)別。少數(shù)生長(zhǎng)在瓊脂表面的菌落，初起時(shí)，