各省、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局(藥品監(jiān)督管理局)，新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)食品藥品監(jiān)督管理局： 　　根據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)規(guī)定，6—(哌嗪基)—2，4—嘧啶二胺—3—氧化物(米諾地爾)為禁用組分。為做好化妝品中米諾地爾的檢測(cè)工作，國(guó)家局組織有關(guān)專家對(duì)《化妝品中米諾地爾的檢測(cè)方法(暫行)》進(jìn)行了論證，并經(jīng)國(guó)家局化妝品標(biāo)準(zhǔn)專家委員會(huì)審評(píng)通過(guò)，現(xiàn)予印發(fā)，請(qǐng)遵照?qǐng)?zhí)行。 　　國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局 　　二○一○年八月二十三日 　　化妝品中米諾地爾檢測(cè)方法(暫行) 　　1 范圍 　　本方法規(guī)定了測(cè)定化妝品中米諾地爾的高效液相色譜法。 　　本方法適用于醇—水、水溶液型發(fā)用化妝品中米諾地爾含量的測(cè)定。 　　當(dāng)樣品取樣量為1g時(shí)，本方法米諾地爾的最低檢出限為10μg/g。 　　2 原理 　　米諾地爾在280nm處有紫外吸收，可用反相高效液相色譜(HPLC)分離，并根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量。 　　3 試劑與材料 　　3.1 甲醇，色譜純。 　　3.2 冰醋酸，分析純。 　　3.3 磺基丁二酸鈉二辛酯，分析純。 　　3.4 高氯酸，分析純。 　　3.5 磺基丁二酸鈉二辛酯溶液[ρ=3.0g/L]：稱取磺基丁二酸鈉二辛酯3.0g，加甲醇—水—冰醋酸(730∶270∶10)混合溶液約950mL溶解，用高氯酸調(diào)節(jié)至pH3.0，用甲醇—水—冰醋酸(730∶270∶10)混合溶液稀釋至1L，搖勻。 　　3.6 米諾地爾標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液[ρ=0.25g/L]：準(zhǔn)確稱取米諾地爾對(duì)照品0.025g(精確至0.0001g)，置于100mL量瓶中，加磺基丁二酸鈉二辛酯溶液(3.5)適量溶解并定容，搖勻。 　　4 儀器 　　4.1 高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，配色譜工作站。 　　4.2 超聲波清洗器。 　　4.3 高速離心機(jī)。 　　5 分析步驟 　　5.1 樣品預(yù)處理 　　準(zhǔn)確稱取樣品約1.0g(精確至0.001g)，置于50mL量瓶中，加磺基丁二酸鈉二辛酯溶液(3.5)約40mL，常溫超聲提取15min，用磺基丁二酸鈉二辛酯溶液(3.5)定容，搖勻。必要時(shí)可離心，取上清液經(jīng)0.45μm 濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液作為待測(cè)溶液備用。 　　5.2 測(cè)定 　　5.2.1 色譜參考條件 　　5.2.1.1 色譜柱：C18 柱，250mm×4.6mm，5μm; 　　5.2.1.2 流動(dòng)相：磺基丁二酸鈉二辛酯溶液(3.5); 　　5.2.1.3 流速：1.0mL/min; 　　5.2.1.4 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm; 　　5.2.1.5 柱溫：室溫。 　　5.2.2 校準(zhǔn)曲線的制備 　　分別移取米諾地爾標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(3.6)0.20mL、1.00mL、5.00 mL、10.00 mL、20.00mL置于50mL量瓶中，用磺基丁二酸鈉二辛酯溶液(3.5)定容，搖勻。配成含米諾地爾分別為1、5、25、50、100μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在設(shè)定的色譜條件下，分別精密量取10μL 注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，并繪制峰面積—米諾地爾濃度(μg/mL)校準(zhǔn)曲線，線性相關(guān)系數(shù)不小于0.999。 　　5.2.3 樣品測(cè)定 　　在設(shè)定的色譜條件下，精密量取10μL 待測(cè)溶液注入高效液相色譜儀分析。若樣品中米諾地爾含量超過(guò)100μg/mL，應(yīng)用磺基丁二酸鈉二辛酯溶液(3.5)適當(dāng)稀釋后測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積，以校準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)溶液中米諾地爾的質(zhì)量濃度。按以上步驟取兩份樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)，并計(jì)算相對(duì)平均偏差(≤10%)。 　　6 計(jì)算(略) 　　7 色譜圖(略) 　　8 陽(yáng)性結(jié)果的確認(rèn) 　　測(cè)定過(guò)程中，如果有陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)采用液相色譜—質(zhì)譜法進(jìn)一步確證(參見(jiàn)附錄)。 　　附錄：液相色譜—質(zhì)譜法 　　附錄： 　　液相色譜—質(zhì)譜法 　　1 范圍 　　本附錄適用于上述液相色譜法檢出化妝品中米諾地爾的確證。 　　2 儀器設(shè)備 　　液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀。 　　3 液相色譜參考條件 　　色譜柱：C18柱 　　流動(dòng)相：甲醇—水(70∶30)(含0.1%乙酸、0.02mol/L乙酸銨)。 　　4 溶液制備 　　采用流動(dòng)相稀釋制備標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，根據(jù)儀器靈敏度選擇適當(dāng)?shù)臏y(cè)定濃度。 　　5 質(zhì)譜確證依據(jù) 　　表1 監(jiān)測(cè)離子 　　質(zhì)譜類型 母離子[M+H]+/(m/z) 碎片離子(子離子)/(m/z) 　　離子阱 210 193、164、137、125 　　三重四級(jí)桿 210 193、164、110、84 　　至少選擇兩個(gè)離子對(duì)進(jìn)行定性確認(rèn)。陽(yáng)性結(jié)果判斷時(shí)離子對(duì)的相對(duì)豐度比的最大允許偏差見(jiàn)下表2。 　　表2 離子對(duì)的相對(duì)豐度比的最大允許偏差 　　相對(duì)離子豐度 ≥50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 　　允許的相對(duì)偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 　　6 質(zhì)譜圖(略)